①样本应尽量保持新鲜,采样后建议尽快完成测定;
②粗酶液制备过程建议在冰上进行,切勿使用液氮处理样本,且提取后需当天完成检测,严禁冷冻保存,反复冻融对乙醇脱氢酶稳定性有较大影响;
③粗酶液不能用于蛋白浓度测定,若需要使用蛋白浓度计算结果,需另取样本使用PBS或生理盐水按照相同比例,单独提取后再进行蛋白浓度测定;
④试剂二配制后有效期较短,为便于试验安排,附赠一支试剂二作为备用,每支均可满足至少100个样本的测定;
⑤若吸光值大于3.0,请确认96孔板是否为96孔UV板;
⑥若A1测定大于1.5或∆A大于0.5,建议将粗酶液使用蒸馏水适当稀释后再进行测定;若∆A小于0.02,建议适当增加样本量或延长酶促反应时间(延长5-10 min)后再进行测定,计算时相应修改;
⑦准确在15 s和75 s处完成吸光值测定,以保证实验结果的准确性和重复性;若同时测定多个样本,应使用多道移液器且分批进行测定,以确保组间反应时间一致;
[1] Liu J, Zuo X, Bi J, et al. Palliative Effect of Combined Application of Zinc and Selenium on Reproductive Injury Induced by Tripterygium Glycosides in Male Rats[J]. Biological Trace Element Research, 2024: 1-13.(IF 3.9)
[2] Zhou H, Wan S, Luo Y, et al. Hepatitis B virus X protein induces ALDH2 ubiquitin-dependent degradation to enhance alcoholic steatohepatitis[J]. Gastroenterology Report, 2023, 11: goad006.(IF 3.6)